Hvordan man dyrker en parasittens Apicoplast celler i en kultur

Apicoplasts er en type af intracellulær organel til stede i encellede parasitter, der forårsager alvorlige sygdomme som malaria, toxoplasmose og coccidiose . Organeller er komplekse strukturer i en celle, der ikke kan vokse og formere sig af sig selv. De opstod, da en forfader parasitterne opslugt en anden organisme , som blev sandsynligvis relateret til rød alger. Fordi apicoplasts ikke er uafhængige celler , kan de ikke dyrkes i en kultur af sig selv. At dyrke dem er man nødt til at dyrke parasitter. Hvad der følger er instruktioner til kultur røde blodlegemer fase af Plasmodium falciparum , der forårsager malaria.Things du har brug
Parasite Stock RPMI 1640 dyrkningsmedium
Laminar flow hætte
Autoklave hoteltilbud Albumax II serumsubstitut
D-glucose
Hypoxantine
HEPES
Gentamicin sulfat
dyrkningskolber
Cell inkubator
Røde blodlegemer myHotelVideo.com: Vis mere Instruktioner hoteltilbud dyrkning Plasmodium falciparum
1

Sæt celle inkubator til 37 grader Celsius og justere gassammensætning til 1 procent ilt , 3 procent kuldioxid , og 96 procent kvælstof .
2

Autoklavér alle ikke- sterilt udstyr og materialer
3

Arbejde i laminar flow hætte for at opretholde sterilitet , forberede den endelige medie ved at tilføje følgende til RPMI 1640 dyrkningsmedium :

D-glucose til en endelig koncentration på 20 mM.

Hypoxantine til en endelig koncentration på 0,2 mM.

HEPES til en slutkoncentration på 25 mM.

Gentamicin sulfat til en endelig koncentration på 25 mg /L.

Albumax II til en endelig koncentration på 0,5 procent w /v.
4

Fordel den totale mængde medium foretaget i det forrige trin i så mange dyrkningskolber som ønsket og placere dem på shakeren i inkubatoren .
5.

Når mediet har nået 37 grader celsius, tilføje parasitten lager.
6

Skift dyrkningsmediet hver dag for at holde parasitterne godt fodret og levende.
7.

Tilføj røde blodlegemer hver anden dag. De vil blive smittet af de nye parasitter , der bliver genereret i kulturen. Hvis de bliver for mange til en kolbe , deler sit indhold op i to eller flere supplerende.
Hoteltilbud