Fordele og ulemper ved Western Blot

Western-blot , en analytisk teknik, der anvendes til at lokalisere et bestemt protein i en given prøve , beskæftiger evnen af et enzym eller fluorescens -mærkede primære antistof til at binde til dets specifikke antigen . Det er en tre-trins proces, der begynder med gelelektroforese , efterfulgt af membran -blotting og probing med antistoffer. Protein afsløring kan være direkte eller indirekte , med sidstnævnte ved hjælp af et mærket sekundært antistof rettet mod den primære . Selvom accepteret som en rutinemæssig proteinanalyse teknik , western blot har sine begrænsninger samt fordele. Fordel: Følsomhed

En af de største argumenter for western blot er dens følsomhed. På grund af sin evne til at detektere så lidt som 0,1 nanogram af protein i en prøve , kan teknikken teoretisk tjene som en effektiv tidlig diagnostisk redskab , sensing selv den mindste immunogen reaktion fra en virus eller bakterier i en patientprøve . En indirekte western blot yderligere bygger på denne følsomhed fra det sekundære antistof evne til at forstærke intensiteten af signalet detekteres af billeddannende system . Større følsomhed betyder, at der er behov for færre antistoffer til test, der skærer ned laboratorieomkostninger betydeligt
Fordel: . Specificitet

Western Blot-teknikken skylder sin specificitet til to store bidragende faktorer. Først gelelektroforese sorterer en prøve i proteiner af forskellig størrelse , ladning og kropsbygning . Denne fremgangsmåde er i sig selv et stort skridt i retning af detektion, som bånd , der er dannet i gelen allerede give fingerpeg om størrelsen af proteinet eller polypeptidet af interesse. Specificiteten af ​​antistof- antigen-interaktion tjener som den anden stor faktor . Fordi specifikke antistoffer viser affinitet til specifikke proteiner , kan processen selektivt detektere et målprotein selv i en blanding af 300.000 forskellige proteiner
Ulempe: . Tilbøjelige til falske eller Subjektive Resultater

på trods af sin sensitivitet og specificitet , en western blot kan stadig producere fejlagtige resultater. En falsk-positive resultater, når et antistof reagerer med en ikke- bestemt protein, som er det ofte sker, når en patient bliver testet for HIV tilfældigvis har tuberkulose eller en række af parasitiske infektioner. En falsk negativ , på den anden side , kan nemt opstå, hvis større proteiner ikke er tilstrækkelig tid til at overføre ordentligt til membranen. Forkert blotting og behandling ofte producerer skæv , falmet , eller endda flere bånd , hvilket gør testresultater underlagt fortolkningen af ​​tekniker
Ulempe: . Høje omkostninger og teknisk Demand

prisen for en western blot er sammensat af de store individuelle udgifter til mærkede antistoffer , dygtige analytikere og laboratorieudstyr. En delikat proces , western blotting kræver præcision i hvert trin for korrekt identifikation af en prøve vælgere . En mindre fejl i reagenskoncentration eller i inkubationstiden kan være katastrofalt for hele processen . Endelig det nødvendige udstyr til sporing og visualisering - kemiluminescens , fluorescerende, radioaktivt eller laser afsløring systemer - kan være for dyrt for den gennemsnitlige mikrobiologi enhed
hoteltilbud .