Basal aktivitet af SP6 Promotor

In vitro forsøg er dem, der gennemføres uden for en levende organisme i et reagensglas eller en lignende miljø . Forskere kan gøre RNA kopier eller udskrifter af et gen in vitro ved hjælp af en proces, der kaldes in vitro transskription. Enzymet , der gør RNA-transkriptet baseret på gen kaldes en RNA-polymerase . Et sådant molekyle er SP6 -polymerase. Det kræver en strækning af DNA kaldes SP6 -promotoren for at fungere korrekt. Promotorer

En promotor er den region af DNA bundet af en RNA- polymerase for at initiere transkription . SP6 -polymerase kræver, at en meget specifik sekvens være til stede i promotoren for at binde , så når SP6 polymerase anvendes til in vitro transkription, skal genet indeholder SP6 -promotoren til transkription . SP6 -polymerase er fra en type virus kaldet en bakteriofag ; biotekselskaber producere denne polymerase ved at inficere salmonellabakterier med fag og efterfølgende isolere polymerase.
Expression

Basal udtryk eller aktivitet refererer til niveauet for ekspression i fravær af andre molekyler , der vil øge eller sænke niveauet af transkription . Aktivatorer eller repressorer , for eksempel, er proteiner , der kan binde til promotoren eller andre gen- regulatoriske regioner og enten hjælpe rekruttere RNA-polymerasen eller forhindre binding. Induktorer er molekyler , der øger produktionen af genet produkt ved at hæve udtryk niveauer .
SP6

Basal aktivitet for SP6 promotor vil variere afhængigt af betingelserne for dit eksperiment. Den vigtigste overvejelse , er naturligvis, hvordan dine eksperimentelle forhold kan påvirke aktiviteten og hvordan SP6 sammenligner til andre systemer. I almindelighed, SP6 polymerase og initiativtagere levere lavere effektivitet end de T7 eller T3 in vitro transskription systemer , selv under ideelle forhold SP6 er nogenlunde sammenlignelig med disse to andre. Ligesom SP6 , både T7 og T3 anvender en RNA-polymerase fra bakteriofag .

Betingelser

Salt koncentration og temperatur er to vigtige faktorer, når basale aktivitet . SP6 er meget følsom over for saltkoncentration , så højere saltkoncentrationer kan nedsætte dets aktivitet meget. Alt andet lige er, udtryk er væsentligt større på 104 grader Fahrenheit end ved 99 grader Fahrenheit. Nukleotid -koncentration er en anden vigtig overvejelse . Lave koncentrationer kan potentielt forårsage transkription at opsige tidligt, og derved mindske din effektivitet. Forøgelse af nukleotid fusionen vil undgå dette problem. Hvis du syntese af RNA-prober dog at tilføje for meget umærket nukleotid vil nedsætte mængden af ​​mærket nukleotid i det endelige produkt .
Hoteltilbud