Polymeriseringsmekanisme i SDS Gel

SDS-PAGE er en procedure forskerne bruge til at adskille proteiner baseret på, hvordan de migrerer gennem en gel. De geler er fremstillet af en polymer kaldet polyacrylamid. Når du laver en polyakrylamidgel , du starter med en blanding af kemikalier : acrylamid, bisacrylamid , SDS og en buffer kemikalie for at stabilisere pH-værdien. Tilføjelse af en persulfat forbindelse og en anden kemisk stof kaldet TEMED vil medføre akrylamid at danne lange kæder eller polymerisere . Indledning

persulfat -ion i ammoniumpersulfat svarer til to sulfat ioner forbundet af en svag ilt - oxygen-binding . Denne obligation kan kløve eller bryde i to , hvilket giver sulfat radikaler --- meget reaktive molekyler med en uparret elektron . Sulfatet radikal kan reagere med vand for at generere en hydroxylgruppe , eller det kan reagere med acrylamidmonomeren at starte polymeriseringsreaktionen . TEMED fungerer som en katalysator , der accelererer hastigheden, hvormed persulfat ioner danner radikaler.
Chain Reaction

Når en hydroxyl eller sulfat radikal er dannet, det angriber en acrylamidmonomer , at tage en af ​​elektronerne i dobbeltbinding. Acrylamidmonomeren er nu en gruppe med en uparret elektron , så det går på at angribe en acrylamidmonomer på en lignende måde . Denne serie af begivenheder skaber en hurtigt voksende kæde af acrylamidmonomerer forbundet af en enkelt obligationer. Den kædereaktion kun slutter, når to grupper reagerer med hinanden .
Cross- Linking
p Hvis akrylamid var til stede på sin egen, vil det ikke danne den tykke gel , du har brug for SDS-PAGE. Polymererne skal være krydsbundet at danne en gel med de rigtige egenskaber , og det er her bisacrylamid kommer i. dobbeltbindinger i bisacrylamid også tjener som et mål for radikale i reaktionen , og fordi den har to steder, hvor det kan være angrebet af radikaler , er det i sidste ende indarbejdet i to af de voksende polymerer. Derfor polymerer ender med tværbindinger mellem dem på tilfældige steder langs længden af ​​hver kæde .

Overvejelser

Polymeriseringsreaktionen er meget hurtig, så når du ' ve tilføjet TEMED og persulfat, det vil finde sted meget hurtigt. Renheden af ​​dine reagenser er vigtig, fordi forurenende stoffer kan påvirke dine resultater. Acrylsyre, for eksempel kan tilsættes til polymeren og skaber ionbytnings- sites, der kan forårsage lokal pH-variationer i din gel. Den resulterende gel kan stadig indeholde nogle acrylamidmonomer , og acrylamid er en nervegift , så altid tage passende forholdsregler , når der arbejdes med SDS-geler .
Hoteltilbud