Metoder til en Gær Tre Hybrid System

replikering af kromosomer , messenger-RNA forarbejdning, oversættelse af proteiner , og kritiske beslutninger i tidlige stadier af udvikling afhænger af samspillet mellem DNA, RNA og proteiner. Disse interaktioner er de grundlæggende biologiske processer af genekspression og proteinsyntese. Forskere bruger ofte Saccharomyces cerevisiae de samme arter af gær , der anvendes i bagning og brygning , for at studere de gener, der koder for specifikke proteiner og analysere samspillet mellem proteiner og andre molekyler. Gæren tre- hybrid- systemet er en af ​​tre varianter af gær-to - hybrid-system bruges til at studere disse interaktioner . To- Hybrid System

to - hybrid metoden anvendes til at påvise protein-protein interaktioner ved at lede efter ekspression af en reporter gen. Mange proteiner har mindst to domæner, eller diskrete strukturelle og funktionelle enheder. GAL4 , et protein der findes i Saccharomyces cerevisiae , har et DNA-bindende domæne ( DBD ) og et aktiverende domæne (AD) . I denne metode , er en hybrid fusioneret til DBD og et andet til AD . Ingen reportergenet udtrykkes ved fusion af én af hybriderne . Da GAL4 reporter genet kun udtrykkes , når begge hybrider er til stede , er protein-protein interaktion angivet.
Tre- Hybrid System

tre- hybrid metode identificerer et reportergen til at detektere interaktionen af ​​protein med RNA. Den første hybridprotein består af et DBD fusioneret direkte til en RNA-bindende domæne. Den anden består af AD GAL4 transkriptionsfaktor bundet til et RNA-bindende protein . Det RNA-bindende domæner interagere med en hybridmolekyle af RNA , der binder de to hybride proteiner til dannelse af et kompleks. Dannelsen af ​​komplekset udløser ekspressionen af ​​GAL4- reporter -genet. Da reportergenets kun tændes ved dannelsen af ​​de tre- hybrid kompleks , dens tilstedeværelse viser interaktionen af RNA og protein.
One- Hybrid System

en hybrid metode anvendes til at detektere interaktionen af ​​proteinet med DNA. Et hybrid-system sikringer et enkelt protein , som forbinder AD direkte til DBD . Stedet for at identificere et reportergen denne fremgangsmåde ser for et specifikt protein , der skal genkende en målsekvens af DNA. Tilstedeværelsen af den specifikke protein indikerer interaktionen af protein med DNA.
One-Two Hybrid System

et-to hybrid metode bruges til at studere protein - protein og protein - DNA- interaktioner samtidigt. Brug nyudviklede gærstammer denne metode anvender GAL4 reportergen til at identificere protein-protein- interaktioner og en p53 konsensus at identificere protein - DNA- interaktion. Metoden forventes at øge præcisionen af ​​eksperimentelle resultater ved at reducere forekomsten af ​​falske positiver er opnået i andre hybride systemer .
Hoteltilbud