GSH assayprotokoller

Glutathion eller GSH er et protein, der findes i både planter og dyr. Det virker til at hjælpe enzymreaktioner i afgiftning af miljøbelastende stoffer . Desuden letter aminosyre transport i celler og bidrager til at opretholde reaktioner sulfhydryl reduktion protein . GSH Assay protokoller anvender GSH buffere , standarder, substrat , enzymer og reagenser. Efter den specifikke procedure er relevant for resultatet af analysen. Enzymatisk Genbrug Metode

enzymatiske genbrug metode til GSH , bruger glutathionreduktase at kvantificere GSH . Denne protokol er specielt for plasma, væv eller dyrkede celleprøver . Tilsæt reagens DTNB (5- 5'- dithio -bis -2 -nitrobenzoesyre ) til GSH . Sulfhydrylgruppen GSH reagerer med reagenset og danner en gul syre kaldet 5 - thio -2 -nitrobenzoesyre ( TNB ) . Tilføj glutathionreduktase til syren og GSH blandingen at genbruge GSH og producerer mere syre. I denne procedure , satsen for syre produktion er proportional med genbrug reaktion GSH ; derfor , måles absorbansen af TNB syre ved hjælp af et spektrofotometer. Absorbansen giver et skøn over den faktiske mængde GSH i prøven.
Levercelle Glutathione Assay

Denne protokol analyserer mængden af ​​GSH i human hepatocarcinoma ( leverkræft ) celler. At gennemføre denne procedure , skal du bruge den kolorimetriske metode til GSH vilje til at reducere og oxidere GSH . Reducer GSH anvendelse af 5- 5'- dithiobis ( 2 -nitrobenzoesyre eller DTNB ) til dannelse af

farvet produkt 2-nitro -5- thiobenzoesyre og oxideret glutathion ( GSSG ) . Brug glutathionreduktase at reducere GSSG til dannelse af GSH igen. For at måle mængden af ​​GSH i leverceller , læse prøven ved 415 absorbansen kinetisk på en mikropladelæser .
Celleapoptose

dette protokollen er GSH anvendes til at detektere apoptose ( død) ved måling af faldet i reduceret GSH . Et fald i koncentrationen af ​​cellulært GSH er en indikator for celledød. Farv prøvecellerne med ikke-fluorescerende thiolite grøn. Den thiolite grønne akkumuleres i cytosolen (celle plasma) og mitokondrier ( kraftværk ) af cellen. Brug et flowcytometer på 490/520 nanometer til at visualisere mængden af ​​GSH i cellerne.
Samlede koncentration af GSH i dyre-og plantearter Prøver

måle koncentrationen af samlede GSH i både reducerede og oxiderede form i forskellige dyre-og plantearter prøver. Tilsæt generelle thiolreagens , 5- 5'- dithiobis [2 -nitrobenzoesyre ] . Den thiolreagens reagerer med GSH til dannelse af 412 nm kromofor 5- thionitrobenzoic syre ( TNB ) og GS- TNB . Tilføj glutathionreduktase og beta -nicotinamid -adenin-dinucleotid -phosphat ( NADPH ) for at reducere GS- TNB . Glutathion vil også frigive en anden TMB molekyle og genbruger GSH . Desuden er enhver oxideret GSH ( GSSG ) til stede i blandingen fromed fra disulfid reaktionen også reduceret til GSH . Brug en mikropladeaflæser på 405 nanometer til at læse absorbansen niveau, og angive den samlede koncentration af GSH .
Hoteltilbud