Tørring Metoder Protokol for PVDF

Når bindende nukleinsyrer eller proteiner , en high- bindende materiale kaldet PVDF ( polyvinyldifluorid ) membran giver støtte til antistofferne. Gennem Western blotting membranerne stablet sammen, forberedt til antistoffet og derefter tørret . Protokol til tørring af membranen kræver viden om , hvordan membraner virker, katodeplader , anodeplader og anvendelse af methanol -løsninger. Med den korrekte protokol , membranen sikkert binder det specifikke antistof , og er klar til øjeblikkelig brug eller opbevaring. Klargøring af Membrane

Forberedelse af PVDF membranen renser og stabiliserer membranen før overførslen . Før tørring membranen "blokerede " for at forhindre binding af andet end de specifikke nukleinsyrer , såsom ikke-specifikke antistoffer. Under denne procedure , du våd membranen ved at lægge den på en flad overflade dækket i methanol. Membranen skifter farve i løbet af denne sætning , fra uigennemsigtige til halvgennemsigtige . Når færdig med methanol-bad membranen placeret i deioniseret vand for at suge i cirka to minutter. Membranen skal derefter suge igen i en methanol -løsning, der er meget sure .
Assembly af membraner før overførsel

To af membran papirer er dyppet i den første methanolopløsning og anbragt på en anode plade. Under denne proces skal du nøje tjekke for luftbobler , der kan kompromittere overførslen. Et andet stykke filterpapir udblødes i den anden methanolopløsning og anbragt på toppen af ​​stakken . En gel går derefter på toppen af membranen med omhu for ikke at fælde luftbobler mellem gelen anvendelse og membran. Tre nye stykker papir derefter gennemvædet i en katode puffer og anbragt oven på gelen. Hvis nogen luftgennembobling opstår et reagensglas arbejder for at udjævne membranerne.
Transfer

I denne del af processen , du tilslutter højspænding ledninger til en strømforsyning og anvende en konstant strøm til gelen område på membranen i 30 minutter. Overfør vil variere afhængig af typen af ​​antistof. Efter 30 minutter du fjerne strømforsyningen og overførsel membran. Den nederste højre hjørne af membranen skæres derefter for at kontrollere orientering. De første to lag filtrerpapir kasseres , herunder gel. Båndene af molekylvægten er markeret med en kuglepen.
Tørring

Når overførslen er færdig, tør du membranen på en af ​​to måder. For hurtigere tørring membranen opblødt i 100 procent methanol i 10 sekunder for at fjerne alt vandet. Membranen hviler derefter på et stykke køkkenrulle i 15 minutter. For en langsommere tørremetode er membranen placeret på køkkenrulle uden tilsætning af methanol. Når tørret , kan membranen anvendes eller opbevares i en tør beholder ved 4 grader Celsius til fremtidig brug.
Hoteltilbud