Fjern hætteglas karboanhydrase , cytochrom C og aprotinin fra køleskabet eller fryseren og give dem mulighed for at opnå stuetemperatur. Tilsæt 4 mg af hvert protein til et centrifugerør per milliliter af gel filtrering kolonne. Tilføj 961 mcl af basal salt per milligram protein til hvert centrifugerør for at opløse proteiner. Tilføj 39.2 MCL af ferritin per milliliter gel til hvert rør og derefter blandes i en centrifuge .
2
Sluk for filtrering kolonne pumpe og lukke stophanen ved kolonne indgangen. Skru , men ikke fjerne , den øverste del af filtrering kolonne. Indstil pumpen til det maksimale flow for kolonnen og genstarte pumpen indtil bufferen materiale er blevet trukket fra. Stop pumpen .
3
Tilsæt 1 ml af hver protein til filtrering kolonnen ved hjælp af en pipette pumpe. Dryp proteinerne ned langs indersiden af søjlen fra en højde på 1 cm til 2 cm , der arbejder rundt om den indre kant af søjlen. Lad proteinblandingen at bosætte sig på toppen af gelen matrix.
4
Placer udløbsslangen af pumpen i en ren, tør 250 ml måleglas . Genstarte pumpen ved en hastighed på 0,30 ml pr minut, og køre proteinerne i gelen matrix. Mens pumpen kører, skylles sider af røret ved hjælp af pipette pumpe og en lille mængde puffer væske. Når proteinerne er fuldstændigt ind i gelmatrixen nedsætte pumpens hastighed til 0,02 ml pr minut og pumpe i en 5 cm til 7 cm lag af buffervæsken på toppen af matrixen.
5
Afbryd kolonne hætten fra stophane. Rengør kolonnen hætte og den indvendige side af kolonnen ved hjælp af videnskabelige renseservietter . Geninstaller kolonne cap. Fyld stødpudebeholderen med puffer væske. Vedhæft en sprøjtecylinder til stophanen og åbne det. Brug sprøjte til at udtrække en lille mængde puffer gennem slangen og ind i sprøjten. Vandhanen lukkes , og sæt det til kolonnen toppen. Åbn vandhanen og kontrollér for lækager .
6
Kør kolonnen på 0,02 ml per minut i flere dage, indtil ferritin bandet nærmer sig enden af kolonnen. Saml alle gelfiltreringen der pumpes ud i måleglas .
Hoteltilbud