Sådan bruges GSH Niveauer i Afsløring ROS

Glutathione , eller GSH , er en ikke-essentiel tripeptid lavet af cystein, glutamat og glycin. Det er en kraftig antioxidant , der beskytter celler og organer i kroppen fra de skadelige virkninger af ROS , eller reaktive ilt arter , som er dannet fra molekylær ilt som et resultat af forskellige metaboliske processer i kroppen . Antioxidanter, såsom glutathion , neutralisere ROS og forhindre dem i at interagere med og beskadige DNA og protein i celler. Forholdet mellem oxideret og reduceret form af GSH i din krop er vejledende for ROS -relaterede oxidativt stress i dit body.Things du har brug
Syringe
Butterfly nål
Centrifuge
Natriumheparin
Fryser
sulfosalicylsyre
GSH Reaction Agent
Mikroplade
Lyskilde
GSH standardløsning myHotelVideo.com: Vis Flere Instruktioner
1

Tegn cirka 2 ml blod ved venepunktur til anticubetal vene med en 23 -gauge butterfly-nål fastgjort til en 5 ml sprøjte . Føj prøven for at teste rør indeholdende natrium heparin og vend forsigtigt røret for blanding .
2

Saml de røde blodlegemer ved centrifugering af prøven ved 2.500 omdrejninger i minuttet i fem minutter. Frys og tø prøven tre gange for at bryde cellerne. Centrifugeres cellelysat opløsningen i 10 minutter ved 12.000 rpm og 4 grader , og indsamle supernatanten.
3

Fjern protein fra prøven ved tilsætning af 5 pct sulfosalicylsyre og centrifugering af prøven ved 12.000 rpm i fem minutter ved 4 grader. Opbevar deproteineret supernatanten ved -112 grader.
4

Bland en thiol afsløring agent , GSH reduktase, nicotinamidadenindinucleotidphosphat og assaybufferen i proportioner , der er angivet af fabrikanten kit til at gøre GSH reaktionsblandingen. Mængden af ​​hvert kemikalie afhænger af antallet af tests, du har til hensigt at udføre. GSH Fortynd reaktionsblandingen i 5 procent sulfosalicylsyre at få koncentrationer på 16, 32, 63 , 125, 250 og 500 mikroliter .
5

Tilføj 1 til 10 mikroliter af deproteineret blodprøve i brøndene en mikroplade . Tilføj seriefortyndes GSH standard løsning, som er til rådighed i test kit , til hver brønd for at bringe det samlede volumen af ​​hver brønd til 10 mikroliter .
6

Tilføj 90 mikroliter GSH reaktionsblandingen , du har foretaget i trin 4 til hver brønd i mikropladen . Reagenset blandes ved at ryste pladen i 30 sekunder.
7

Absorbansen øjeblikkeligt ved at anbringe pladen under lys med bølgelængder på 405 og 415 nanometer. Inkubér pladen i 30 minutter. Tag absorbanslæsninger efter hvert femte minut under inkubationen .
8

Fortynd 6 millimolær af det forarbejdede prøve med 5 procent sulfosalicylsyre og trifluromethane sulfonat løsning . Dette vil fjerne al den reducerede GSH fra opløsningen. Tilføj 1 til 10 micoliters af denne opløsning til brøndene i mikroplade og gentage trin 5 , 6 og 7 . Dette vil hjælpe anslå mængden af ​​oxideret GSH i prøven.
9.

Plot absorbansen og prøve koncentrationer på en graf at opnå GSH kurven for både reduceret og oxideret glutathion . Beregne forholdet mellem de to former for GSH . Øgede niveauer oxidativ GSH niveauer indikerer oxidativ stress og ROS .
Hoteltilbud