Fyld vandbad til det anbefalede niveau med vand, som varierer med hver fabrikantens specifikationer, og tænd den. Sæt vandbad til 65 grader Celsius , og lad den komme op på temperaturen . Placer isopropanol beholder på is. Indstil centrifugeres ved 3.000 omdrejninger i minuttet ved en temperatur på 20 grader Celsius.
2
afvejes 2 g blade på en balance og placere dem i en morter. Tilføj nok beta- mercaptoethanol via pipette til en beholder ekstraktionsbuffer så slutproduktet består af en til to procent beta- mercaptoethanol. For eksempel, hvis du har en volumen buffer , der måler omkring 100 ml , hvorefter der tilsættes 2 ml beta -mercaptoethanol til beholderen og blandes grundigt.
3
afpipetteres 7 ml ekstraktionsbuffer i mørtel . Knus blandingen i en homogen væske med pistil.
4
Fold et stykke ostelærred over til at danne fire lag . Stamme og presse væsken gennem lagene i en 15 - ml-centrifugerør .
5
Placer røret i vandbad i 30to 60 min Ute . Swirl røret for at blande indholdet hvert kvarter . Lad røret for at afkøle til stuetemperatur efter den fulde periode er op .
6
Top op i glasset med kloroform og isoamylalkohol blanding ( dette indeholder 24 dele chloroform til en del isoamylalkohol ), så røret indeholder omtrent halvdelen prøven og halvdelen det nye flydende tilsætning . Sæt låg på røret og vend det på hovedet et par gange langsomt, så væsken blandinger.
7
Sæt røret i centrifugen og lad det snurre i 10 minutter.
8
Placer 50 ml RNase A ind i en ny centrifugerør. Pipette supernatanten (den klare lag på toppen af røret over et hvidt lag af snavs ) i det første rør og flytte den til det andet rør . Sæt låg på røret og vend det et par gange for at blande indholdet sammen . Hold røret ved stuetemperatur i en time.
9
Udfør trin 6 og 7 igen to gange, så du har en klar prøveglas . Derefter fyldes op til 9 ml af den klare væske fra det endelige rør ind i et nyt rør . Tilføj 6 ml isopropanol og vend rørene 10 gange på en skånsom måde , så DNA falder ud af opløsning og i en fast form. Derefter centrifugeres i 10 minutter som skal skabe en pellet af DNA i bunden af røret.
10
Hæld væsken i røret, så pelleten tilbage. Afpipetteres i 2 ml 70% ethanol og sted tilbage i centrifugen i fem minutter. Hæld den flydende del igen. Brug en steril pipettespids at afhente pellet og flytte det til en steril 1,5 ml Eppendorf-rør . Afpipetteres i 200 mikroliter af sterilt deioniseret vand og lad DNA opløses fuldstændigt i væsken , hvilket kan tage natten over. Prøven er derefter klar til analyse.
Hoteltilbud