Alle blotting teknikker starter med gelelektroforese. Gelen er mere eller mindre som et tyndt rektangel af gelatine . En lille mængde af et specielt forberedte biologiske molekyler er sat på gelen i den ene ende , så en elektrisk felt anvendes fra den ene ende til den anden. De fremstillede molekyler er elektrisk ladet , så det elektriske felt trækker dem gennem gelen . De bevæger sig langsomt gennem tyk gel indtil feltet er slukket. De lettere molekyler få trukket hurtigere og bevæge sig yderligere , de tungere molekyler tage længere tid at bevæge sig, så de ikke gøre det så langt .
Brug Gels
praksis , flere forskellige prøver sættes ned spredt ud langs den ene kant af gelen. Efter det elektriske felt anvendes, de forskellige prøver spredes ud på vej til den modsatte kant af gelen. Udbredelsen af hver prøve kaldes en " bane ". Banen vil normalt have et par forskellige bånd svarende til molekyler med forskellige vægte i hver prøve. Der er flere forskellige måder at gøre båndene synlige. Analyse af gelen giver biologerne en idé om størrelsen af de forskellige molekyler , men at få mere information , er der behov for en anden metode . Det er, hvor blotting kommer ind .
Blotting
Blotting er en måde at tage de molekyler, der er blevet spredt fra hinanden i gelen og gøre dem tilgængelige for flere analyse. På samme måde trækpapir opsuger løs blæk --- eller gjorde i de dage, hvor folk brugte fyldepenne --- biologisk blotting " opsuger " molekylerne fra gelen i et andet materiale . Molekylerne ender i det samme mønster , men nu i et specielt papir eller plastfolie . Molekylerne bliver bundet til pladen , så de ikke bevæger sig mere, og så kan de lægges i blød i en opløsning af andre probemolekyler , der giver mere information om molekylerne. Der er flere forskellige måder at gøre disse skridt , men princippet er det samme for dem alle.
Sydlige , nordlige og vestlige blotting
Biolog Edwin sydlige var første til at udvikle en blotting teknik. Han udviklede alle de nødvendige oplysninger for at være sikker på, at DNA gelelektroforese kan præcist overføres og måles i blotting materiale. Denne metode blev opkaldt efter ham : Southern blotting . Andre forskere regnet ud, hvordan man kan gøre det samme generelle teknik arbejde for RNA og --- i typisk sjov-kærlig videnskabsmand stil --- kaldte deres detaljeret metode Northern blotting . Senere blev proceduren modificeret til måling af proteiner og blev kaldt Western blotting . Alle tre teknikker bruger de samme principper: . Southern foranstaltninger DNA , Northern foranstaltninger RNA , vestlige foranstaltninger proteiner KAYAK